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I C S 6 5.0 2 0C C S B 6 16111杨 凌 农 业 高 新 技 术 产 业 示 范 区 地 方 标 准D B 6 1 1 1/T 2 1 1 2 0 1 4羊 肚 菌 菌 种 生 产 技 术 规 程T e c h n i c a l r e g u l a t i o n s f o r t h e p r o d u c t i o n o f M o r e l s t r a i n s2 0 2 4-0 5-2 3 发 布 2 0 2 4-0 6-2 3 实 施杨 凌 示 范 区 市 场 监 督 管 理 局 发 布D B 6 1 1 1/T 2 1 1 2 0 1 4I前 言本 文 件 按 照 G B/T 1.1 2 0 2 0 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分：标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则 的 规 定起 草。请 注 意 本 文 件 的 某 些 内 容 可 能 涉 及 专 利。本 文 件 的 发 布 机 构 不 承 担 识 别 专 利 的 责 任。本 文 件 由 杨 凌 示 范 区 现 代 农 业 和 乡 村 振 兴 局 提 出 并 归 口。本 文 件 起 草 单 位：杨 凌 职 业 技 术 学 院、杨 凌 君 宝 家 庭 农 场、陕 西 杨 凌 金 麒 麟 生 物 科 技 有 限 公 司。本 文 件 主 要 起 草 人：杜 璨、王 锋、胡 煜、姚 瑞 祺、杜 璇、周 济 铭、黄 无 非、高 敏、赵 玉 鹏、任 文 飞、强 磊、张 嘉 程、陈 德 财、王 时 聪、王 玉 鹏、李 应 涛。本 文 件 首 次 发 布。本 文 件 由 杨 凌 职 业 技 术 学 院 负 责 解 释。联 系 人：杜 璨联 系 方 式：1 8 5 0 2 9 0 9 5 1 2联 系 地 址：陕 西 省 杨 凌 示 范 区 渭 惠 路 2 4 号D B 6 1 1 1/T 2 1 1 2 0 1 42羊 肚 菌 菌 种 生 产 技 术 规 程1 范 围本 文 件 规 定 了 羊 肚 菌 菌 种 生 产 的 术 语 和 定 义、生 产 要 求、技 术 要 求、检 验、贮 藏、记 录 与 留 样、标签、标 志、包 装、运 输 和 贮 存 等 要 求。本 文 件 适 用 于 羊 肚 菌 各 级 菌 种 生 产。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必 不 可 少 的 条 款。其 中，注 日 期 的 引 用 文 件，仅 该 日 期 对 应 的 版 本 适 用 于 本 文 件；不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本（包 括 所 有 的 修 改 单）适 用 于 本文 件。G B 1 9 1 包 装 储 运 图 示 标 志G B 5 7 4 9 生 活 饮 用 水 卫 生 标 准G B/T 1 2 7 2 8-2 0 0 6 食 用 菌 术 语N Y/T 5 2 8 食 用 菌 菌 种 生 产 技 术 规 程N Y/T 1 7 4 2 食 用 菌 菌 种 通 用 技 术 要 求N Y/T 1 8 4 6 食 用 菌 菌 种 检 验 规 程N Y/T 1 9 3 5 食 用 菌 栽 培 基 质 质 量 安 全 要 求3 术 语 和 定 义下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 文 件。3.1羊 肚 菌 M o r e l学 名：Morchella s p p.。羊 肚 菌 科、羊 肚 菌 属 真 菌。菌 盖 近 球 形、卵 形 至 椭 圆 形，顶 端 钝 圆 或 尖，菌盖 表 面 有 似 羊 肚 状 的 凹 坑，且 凹 坑 大 小 不 定，呈 淡 黄 褐 色 至 深 褐 色。菌 柄 近 圆 柱 形，近 白 色，中 空，圆筒 形，孢 子 长 椭 圆 形，无 色，侧 丝 顶 端 膨 大，体 轻，质 酥 脆。3.2菌 种 S t r a i n s通 过 生 产 试 验 验 证 具 有 特 异 性、均 一 性 和 稳 定 性，产 量 高、抗 性 强 的 菌 株 或 品 种，具 结 实 性 的 菌 丝培 养 物。包 括 母 种、原 种 和 栽 培 种。来 源：G B/T 1 2 7 2 8 2 0 0 6，2.5.6，有 修 改 3.3母 种 S t o c k c u l t u r e具 有 结 实 性 的 菌 丝 体 纯 培 养 物 及 其 继 代 培 养 物。也 称 一 级 种、试 管 种。来 源：G B/T 1 2 7 2 8 2 0 0 6，2.5.7，有 修 改 3.4原 种 P r e-c u l t u r e s p a w nD B 6 1 1 1/T 2 1 1 2 0 1 43由 母 种 移 植、扩 大 培 养 而 成 的 菌 丝 体 纯 培 养 物。也 称 二 级 种。来 源：G B/T 1 2 7 2 8 2 0 0 6，2.5.8 3.5栽 培 种 S p a w n由 原 种 移 植、扩 大 培 养 而 成 的 菌 丝 体 纯 培 养 物。也 称 为 三 级 种。注：只用于扩大到栽培出菇袋或直接出菇，不宜再次扩大繁殖菌种。来 源：G B/T 1 2 7 2 8 2 0 0 6，2.5.9，有 修 改 4 生 产 要 求4.1 生 产 人 员从 事 菌 种 生 产 的 技 术 人 员 和 检 验 人 员，应 经 过 专 业 培 训、熟 练 掌 握 菌 种 生 产 技 术 要 求。4.2 生 产 环 境场 地 选 择、厂 房 设 置 和 布 局、设 备 设 施 应 符 合 N Y/T 5 2 8 的 规 定。4.3 生 产 设 备生 产 菌 种 的 粉 碎 机、电 子 秤、搅 拌 机、装 袋（瓶）机、高 压 灭 菌 锅 或 常 压 灭 菌 锅、超 净 工 作 台 或 接种 箱、恒 温 培 养 箱、培 养 架、显 微 镜 等 设 备，应 符 合 N Y/T 5 2 8 规 定。4.4 菌 种 来 源生 产 原 种 应 从 具 有 相 应 资 质 的 供 种 单 位 引 进。应 选 择 抗 性 强，优 质 高 产、适 合 当 地 栽 培 的 优 良 菌 株。菌 种 质 量 符 合 N Y/T 1 7 4 2 的 要 求。4.5 生 产 原 料生 产 原 种 及 栽 培 种 所 需 的 小 麦 粒、玉 米 芯、麦 麸、石 膏、石 灰 等 主 料 原 料 的 质 量 及 贮 藏 应 符 合 N Y/T1 9 3 5 要 求。生 产 用 水 应 符 合 G B 5 7 4 9 要 求。5 技 术 要 求5.1 母 种5.1.1 容 器应 选 用 1 8 m m 1 8 0 m m 或 者 2 0 m m 2 0 0 m m 的 试 管。试 管 棉 塞 应 使 用 梳 棉、化 纤 棉 或 硅 胶 塞。5.1.2 培 养 基 配 方马 铃 薯 2 0 0 g(用 浸 出 液)，葡 萄 糖 2 0 g，琼 脂 2 0 g，水 1 0 0 0 m L，p H 自 然。5.1.3 分 装 灭 菌配 置 好 的 培 养 基 应 立 即 分 装。装 量 为 试 管 长 度 的 1/4 1/5。试 管 口 应 保 持 洁 净，并 用 试 管 塞 封 口 后包 扎，直 立 放 入 高 压 灭 菌 锅 内（压 力 0.1 2 M p a 0.1 5 M p a、温 度 1 2 1 1 2 6），灭 菌 2 0 m i n。5.1.4 摆 斜 面D B 6 1 1 1/T 2 1 1 2 0 1 44灭 菌 完 成 后，在 压 力 表 指 针 降 为 0 M p a 时，打 开 排 气 阀，立 即 将 试 管 趁 热 摆 成 适 当 的 斜 度，缓 慢 冷却 至 琼 脂 凝 固 成 长 度 不 超 过 试 管 3/4 的 斜 面。5.1.5 接 种5.1.5.1 接 种 室(箱)处 理 程 序清 洁 搬 入 接 种 物 和 被 接 种 物 接 种 室(箱)的 消 毒 处 理。5.1.5.2 接 种 室(箱)消 毒应 药 物 消 毒 后，再 用 紫 外 灯 照 射 3 0 m i n。5.1.5.3 超 净 工 作 台 的 消 毒应 先 用 7 5%酒 精 或 新 洁 尔 灭 溶 液 进 行 表 面 擦 拭 消 毒，之 后 预 净 2 0 m i n。5.1.5.4 接 种 操 作在 超 净 工 作 台 上，严 格 按 无 菌 操 作 要 求 接 种。每 一 箱(室)接 种 应 为 单 一 品 种，接 种 完 成 后 应 及 时 贴好 标 签。5.1.5.5 接 种 点试 管 斜 面 的 中 部。5.1.5.6 接 种 室(箱)后 处 理接 种 室(箱)每 次 使 用 后，要 及 时 清 理 清 洁，排 除 废 气，清 除 废 物，台 面 要 用 7 5%酒 精 或 新 洁 尔 灭 溶液 擦 拭 消 毒。5.1.6 培 养接 种 后，将 试 管 置 于 培 养 室，在 温 度 1 6 2 0，空 气 湿 度 7 5%以 下，通 风 避 光 培 养。定 期 检 查，清 除 污 染 试 管。菌 丝 长 满 试 管，稳 定 3 d 5 d 即 可 用 于 原 种 生 产。5.2 原 种5.2.1 容 器采 用 7 5 0 m L 以 下、瓶 口 直 径 4 0 m m、耐 1 2 6 高 温 的 聚 丙 烯 菌 种 瓶 或 玻 璃 瓶。5.2.2 培 养 基 配 方小 麦 5 3%，玉 米 芯 4 0%，麦 麸 5%，石 膏 1%，石 灰 1%。5.2.3 培 养 基 制 备玉 米 芯 粉 碎 至 5 m m 以 下，用 清 水 浸 泡 2 4 h，沥 干，堆 成 梯 形，在 堆 面 上 每 间 隔 3 0 c m 5 0 c m 打 1 个通 气 孔，用 塑 料 薄 膜 遮 盖，自 然 发 酵 2 4 h 4 8 h 备 用。小 麦 用 1%的 石 灰 水 浸 泡 1 2 h 后，清 水 煮 沸 1 5 m i n，搅 动 至 麦 粒 涨 而 不 破 立 即 捞 出，沥 干。将 发 酵 后 的 玉 米 芯、煮 涨 后 的 麦 粒 与 麦 麸、石 膏、石 灰 等 干 原 料 按 比 例 拌 和 均 匀，含 水 量 6 5%，p H值 6.5 7.5。D B 6 1 1 1/T 2 1 1 2 0 1 455.2.4 装 瓶采 用 装 瓶 机 或 人 工，将 培 养 基 质 装 至 瓶 身 的 3/4 处，装 瓶 后 立 即 灭 菌。采 用 人 工 装 瓶 的，需 用 打 孔器 在 瓶 口 处 打 直 径 1.0 c m 1.5 c m、深 8.0 c m 1 2.0 c m 的 孔。5.2.5 灭 菌灭 菌 要：a)高 压 灭 菌 在 1 2 1 1 2 6 下 灭 菌 3 h 4 h。b)常 压 灭 菌 在 3 h 之 内 使 温 度 升 至 1 0 0，恒 温 保 持 1 0 h 1 2 h。5.2.6 冷 却采 用 高 压 灭 菌 的，灭 菌 结 束 自 然 降 压 至 0.0 5 M p a 以 下，打 开 排 气 阀 降 温 2 0 m i n 3 0 m i n 取 出 料 袋；常 压 灭 菌 的，灭 菌 结 束 后 保 持 3 h 后 取 出 料 袋。迅 速 移 入 冷 却 室，冷 却 至 2 5 以 下 即 可 接 种。5.2.7 接 种5.2.7.1 接 种 室(箱)处 理 程 序同 5.1.5.1。5.2.7.2 接 种 室(箱)消 毒同 5.1.5.2。5.2.7.3 超 净 工 作 台 的 消 毒同 5.1.5.3。5.2.7.4 接 种 操 作同 5.1.5.4。5.2.7.5 接 种 点应 从 容 器 开 口 处 一 点 接 种，不 应 打 孔 多 点 接 种。1 支 母 种 转 接 原 种 不 超 过 6 瓶。5.2.7.6 接 种 室(箱)后 处 理同 5.1.5.6。5.2.8 培 养接 种 后 放 入 培 养 室，温 度 1 5 1 8，相 对 湿 度 不 超 过 6 0%，避 光。保 持 培 养 室 通 风 良 好，每 天通 风 1 2 次，每 次 2 5 m i n 3 0 m i n。1 5 d 2 0 d 菌 丝 长 满 全 瓶 后，继 续 培 养 3 d 5 d 即 可 用 于 栽 培 种 生产。培 养 期 间 应 定 期 检 查，及 时 拣 出 不 合 格 菌 种。5.3 栽 培 种5.3.1 容 器宜 采 用 1 5 c m 2 8 c m 0.0 0 5 c m 或 1 7 c m 3 5 c m 0.0 0 5 c m 规 格 的 聚 丙 烯（高 压 灭 菌）或 低 压 聚乙 烯（常 压 灭 菌）折 角 塑 料 袋。D B 6 1 1 1/T 2 1 1 2 0 1 465.3.2 培 养 基 配 方同 5.2.2。5.3.3 培 养 基 制 备同 5.2.3。5.3.4 装 袋将 培 养 料 分 装 在 塑 料 袋 内，松 紧 适 度，袋 口 和 袋 外 壁 保 持 洁 净。当 天 拌 好 的 料 应 当 天 装 完，并 立 即灭 菌。5.3.5 灭 菌同 5.2.5。5.3.6 冷 却同 5.2.6。5.3.7 接 种1 瓶 原 种 转 接 裁 培 种 不 超 过 6 0 袋，其 他 技 术 要 求 同 5.2.7。5.3.8 培 养同 5.2.8。6 检 验母 种、原 种 和 栽 培 种 的 抽 样、感 官 检 验 和 判 定 按 照 N Y/T 1 8 4 6 中 的 规 定 执 行。7 贮 藏培 养 好 的 菌 种 应 置 于 0 4 的 冷 库 中 贮 存。栽 培 种 贮 存 应 不 超 过 3 0 d。8 记 录 与 留 样8.1 记 录应 详 细 记 录 生 产 单 位、菌 种 来 源、生 产 时 间、生 产 数 量 等 信 息。记 录 表 参 见 附 录 A，保 留 2 年 以 上。8.2 留 样各 级 菌 种 均 应 按 生 产 批 次 随 机 抽 样 留 存 备 查。每 个 批 次 抽 样 留 存 量 应 不 少 于 3 支(瓶、袋)，并 在1 4 条 件 下 保 存 至 正 常 出 菇。9 标 签、标 志、包 装、运 输 和 贮 存9.1 标 签、标 志D B 6 1 1 1/T 2 1 1 2 0 1 47出 售 的 菌 种 应 贴 标 签。注 明 菌 种 品 种、级 别、接 种 日 期、生 产 单 位、地 址 电 话 等。外 包 装 上 应 有 符合 G B 1 9 1 规 定 的 防 晒、防 潮、防 倒 立、防 高 温、防 雨、防 重 压 等 标 志。9.2 包 装母 种 外 包 装 应 用 木 盒 或 有 足 够 强 度 的 纸 盒、原 种 和 栽 培 种 外 包 装 用 木 箱 或 有 足 够 强 度 的 纸 箱 包 装，盒（箱）内 除 菌 种 外 的 空 隙 应 用 轻 质 材 料 填 满 塞 牢。盒（箱）内 应 附 使 用 说 明 书。9.3 运 输菌 种 运 输 中 应 有 防 晒、防 潮、防 雨、防 冻、防 震 及 防 止 杂 菌 污 染 的 设 施 与 措 施。不 得 与 有 毒 有 害 物品 混 装 混 运。9.4 贮 存应 在 干 燥、低 温、无 阳 光 直 射，无 污 染 的 场 所 贮 存。母 种 应 在 4 6、原 种 和 栽 培 种 应 在 1 4 的 冰 箱 或 冷 库 内 贮 存。D B 6 1 1 1/T 2 1 1 2 0 1 48A A附 录 A（资 料 性）羊 肚 菌 菌 种 生 产 记 录 表A.1 羊 肚 菌 菌 种 生 产 记 录 表详 见 表 A.1。表 A.1 羊 肚 菌 菌 种 生 产 记 录 表单位名称：负 责 人：电 话：母种来源：生产时间：生产规模：原种来源：生产时间：生产规模：栽培种来源:生产时间：生产规模：日期 生产内容 投入品内容 使用量 使用设备 操作人 技术负责人注1：生产内容指母种、原种、栽培种生产。注2：投入品内容指母种、原种、栽培种生产中所用的培养基原料及消毒试剂等。记录人：审核人：记录日期：
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