食用菌种质资源收集与菌种保存技术规程DB15／T 3493—2024.pdf

ICS 65.020.01 CCS B 05 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 3493 2024 食用菌种 质资 源收 集与菌种 保存技术 规程 Technical code of collection and culture preservation for edible fungi 2024-06-14 发布 2024-07-14 实施 内蒙古自 治区市 场 监督管理 局 发 布 DB15/T 3493 2024 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分：标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定起草。本文件 由内 蒙古 自治 区农 业果蔬 标准 化技 术委 员会（SAM/TC 25）归口。本文件 起草 单位：内蒙 古 自治区 农牧 业技 术推 广中 心、内蒙 古农 业大 学、内 蒙 古自治 区农 牧业 科学院、内 蒙古 自治 区重 点项 目资金 保障 中心、赤 峰市 农牧技 术推 广中 心、赤峰 市克什 克腾 旗农 牧局、赤 峰市敖汉 旗农 牧局。本文件 主要 起草 人：鲍红 春、李 志平、李 文彪、于 传宗、庞杰、李 小雷、贾 晓东、曹慧、张 欣、郭芳颖、焦 洁、温波、王 建 民、苑兴 文、石雅 君、蒙 可、杨波、邓 海峰、肖 强、王 猛、关潇 滢、肖杰、郑莎、刘 艳梅、季 祥、孔令 江、李 延军、于 凤玲、甄 玲玲、许林 丰、张振 宇。DB15/T 3493 2024 1 食用菌种 质资源 收集与保 存技术 规程 1 范围 本文件 规定 了食 用菌 种质 资源收 集与 菌种 保存 技术 的保藏 库（室）建立、资 源收集、资 源鉴 定、资源整理 及、菌种 资源 保藏。本文件 适用 于食 用菌 种质 资源收 集与 菌种 保存。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB 19489 实验 室 生物 安 全通用 要求 GB 50223 建筑 工程 抗震 设防分 类标 准 NY/T 1846 食 用菌 菌种 检 验规程 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。食用菌 edible mushroom 可供食用 的 大型 真菌，常 包括食 药兼 用和 药用 大型 真菌。多 数为 担子 菌，如 双 孢蘑菇、香菇、草菇、牛肝菌 等。少数 为子 囊菌，如羊 肚菌、块 菌等。菌种保 藏 culture preservation 使菌种 免受 其他 微生 物污 染，保持 其固 有遗 传、生 理、形 态及 其各 种有 研究 和 利用价 值特 性的 微生物学技 术。4 保藏库（室）建 立 选址 要求地 势平 坦、排灌 便利、交通 便捷，远 离工 矿区、公路 铁路 干线 和生 活区，避开 污染 源。规划设 计 DB15/T 3493 2024 2 保藏库（室）设 为引 种观 察区和 保存 区，观察 区和 保存区 建设 要求 相同，观 察区用 于收 集资 源的 观察，保 存区 用于 资源 的保 存。保藏库（室）建 设标 准与 规模 保藏库（室）建设 标准严 格按照GB 19489、GB 50223 执行，建设 规模 根据 需保 藏种质 资源 的多 少 进行科学 合理 设计。5 种质资 源收 集 收集对 象 现有栽 培种、地 方品 种、野生种 的种 质资 源。信息记 载 记载资 源的 名称、类 型、收集时 间、地理 位置、所 属单位、遗 传背 景、生 长 地水土 气候 条件、特 征特性（如颜 色、形 状、大 小、抗性 等）、影 像资 料，并 对资源 进行 编号（如 种类、来源、顺序 等信 息）。资源收 集 5.3.1 菌种实 物的 收集 收集的 菌种 实物 应为 纯培 养物，菌种 来源 包括 自行 分离、交换、购 买、接受 委托保 藏、接受 赠送 等途径。5.3.2 菌种信 息的 收集 5.3.2.1 提供者 应提 供菌 株的 研究 和鉴定 材料，据 实填 写保 藏 机构的 登记 表格，由 保藏 机 构签收 入档。5.3.2.2 保藏机 构应 进一 步收 集和 完善菌 株的 相关 信息。5.3.2.3 菌种信 息建 立电 子数 据库，录入 菌落、子 实体 照片 等原始 直观 信息。6 资源鉴 定 形态特 征 6.1.1 菌丝体 特点 仔细观 察菌 丝生 长是 否正 常，是 否老 化，有无 杂菌、虫害 感染，同 时检 查瓶 袋有无 破损 等。根据 显微镜下 菌丝 颜色、生 活力、有无 锁状 联合 等特 点与 相应菌 种进 行鉴 定。6.1.2 子实体 特点 根据子 实体 菌盖 颜色、大 小，有 无条 纹、瘤、鳞 片、同心圆、管 孔、菌 管、菌齿、菌褶；菌柄 长短、粗细，有无 菌环、菌 托；显微镜 下孢 子形 态等 特点 与相应 子实 体进 行鉴 定。出菇试 验 在各级 菌种 的培 养基 成分、培养 温度、培 养时 间及 栽培条 件基 本一 致的 情况 下进行 出菇 试验。抗性鉴 定 DB15/T 3493 2024 3 6.3.1 耐热性 试验 将菌种 放在适 宜条 件下培 养，待 菌丝长 到1/2 试管 斜 面时，每一菌 株取 出23 支试管，放在 温度 上线环境 下，经过24 h 耐热 性处理，然 后放 到适 宜温 度下培 养，观察 菌丝 恢复 情况，判别 耐热 能力。6.3.2 耐低温 性试 验 将菌 种 放在适 宜条 件下培 养，待 菌丝长 到1/2 试管 斜 面时，每一菌 株取 出23 支试管，放在 温度 下线环境 下，经过24 h 耐热 性处理，然 后放 到适 宜温 度下培 养，观察 菌丝 恢复 情况，判别 耐低 温能 力。6.3.3 抗杂菌 测定 采用平 板测 定的 方法，观 察菌丝 与杂 菌的 交界 处是 否有拮 抗线，判 别抗 杂菌 能力。分子生 物学 鉴定 可采 用DNA 碱基 组成（G+C）mol%、限 制性 片段 长度 多 态性（RFLP）SSR、随机扩 增多态 性（RAPD）、Southerm 印迹 分析、脉 冲 电场凝 胶电 泳（PFGE）以及 小亚 基rDNA（或 rRNA）序 列测定 等方 法 进 行鉴 定。对远缘 种，采 用3 4 个保 守基因 的克 隆/测序 后，进 行系统 发育 分析。对于 近 缘种，采用 AFLP 或RAPD等进行 区分。7 资源的 整理 菌种质 量检 测 按照NY/T 1846 的规 定执 行。菌种复 核 复核菌 株的 保藏 单位 名称、保藏 方式、菌株 保藏 编 号、菌 株名 称（原 定名）、复核 日期、复核 内容及结果（所进 行的 项目及 各项实 验结果)、复 核结 论、复核 人员姓 名、中心负 责人签 字以及 需要 补充 说明的有 关内 容。菌种编 号 将复核 后的 菌株 进行 编号。数据整 理 7.4.1 按照食 用菌 菌种 资源 描述 对菌株 进行 数据 整理。7.4.2 建立菌 株的 纸质 信息 和数 字化信 息档 案并 备份。7.4.3 档案应 安全 存放，注 意防 潮、防 霉、防虫、防 火、防磁和 防盗。8 菌种资 源保 藏 菌种保 藏 8.1.1 前期准 备 检查保 存设 施，应确 保正 常运行，设 专人 负责 管理，定期 检修 维护。设 施应 有备用 电源，防 止断 电事故发 生。DB15/T 3493 2024 4 8.1.2 保藏方 法 可采用 液氮 超低 温保 藏法、低温 定期 移植 保藏 法、液体石 蜡保 藏法、自 然基 质保藏 法、沙土 管保 藏法、滤 纸片 保藏 法、生理 盐水保 藏法、蒸 馏水 保藏 法等，针对 保存 菌株 确定 适宜的 方法，同 一菌 株 应 选用 两 种或 两 种以 上 方法 进行 保 存，只 能采 用 一种 保藏 方 法的 菌 株必 须 备份 并存 放 于两 个 以上 的 保存设备中，重要 菌种 应异 地保 存备份。8.1.3 记录入 档 菌种的 入库 和出 库应 记录 入档，实行 双人 负责 制管 理。定期复 核 定期检 查菌 种保 存效 果，及时分 离纯 化复 壮。每次 检查要 有详 细记 录。废弃物 处置 废弃物 的处 置严 格按 照GB/T 19489 有 关规 定执 行。