黑土地土壤微生物肥力评价规范DB15／T 3609—2024.pdf

ICS 65.020.01 CCS B 10 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 3609 2024 黑土地土 壤 微生物 肥力评价 规范 Specification for evaluation of soil microbial fertility in black soil 2024-07-22 发布 2024-08-22 实施 内蒙古自 治区市 场 监督管理 局 发 布 DB15/T 3609 2024 I 前 言 GB/T 1.1 2020 1(SAM/TC 20)DB15/T 3609 2024 1 黑土地土 壤微生 物肥力评 价规范 1 范围 2 规范性 引用 文件 GB/T 601 GB 20287-2006 GB/T 33469-2016 HJ 613 LY/T 1220 NY/T 1121.1 1 3 术语和 定义 土壤微 生物 肥力 soil microbial fertility 土壤微 生物 生物 量 soil microbial biomass 5 m3 103 m3 土壤呼 吸强 度 soil respiration intensity 4 土壤样 品的 采集、制 备及 基础指 标测 定 DB15/T 3609 2024 2 采样时 间 7 8 采样方 法 4.2.1 样地设 置 1 hm2 100 m 100 m 50 m 200 m 4.2.2 采样单 元确 定 3 4.2.3 样品采 集 15 20 0 cm 20 cm 1 kg NY/T 1121.1 1 kg 3 样品处 理 4.3.1 样品保 存 4 4 48 h 4 4.3.2 样品制 备 10 100 土壤含 水量 和有 机碳 的测 定 HJ 613 GB/T 33469-2016 C 5 土壤微 生物 肥力 评价 指标 及测定 土壤微 生物 肥力 评价 指标(1)qSMBC=C mic/C org(1)DB15/T 3609 2024 3 qSMBC Cmic Corg 评价指 标的 测定 5.2.1 微生物 数量 测定 GB 20287-2006 6.3.2 GB 20287-2006 A A.1 A.6 5.2.2 微生物 生物 量测 定 5.2.2.1 微生物 生物 量碳 A A.1 5.2.2.2 微生物 生物 量氮 A A.2 5.2.3 土壤酶 活性 测定 5.2.3.1 纤维素 酶活 性 GB 20287-2006 D D.1 5.2.3.2 蔗糖酶 活性 3,5-B B.1 5.2.3.3 脲酶活 性 B B.2 5.2.3.4 磷酸酶 活性 B B.3 5.2.3.5 过氧化 氢酶 活性 B B.4 5.2.3.6 硝酸还 原酶 活性 B B.5 5.2.3.7 多酚氧 化酶 活性 L-DOPA B B.6 5.2.4 土壤呼 吸强 度的 测定 DB15/T 3609 2024 4 LY/T 1220 6 土壤微 生物 肥力 评价 方法 确定各 评价 指标 权重 1()GB/T 33469 表1 黑土地 土壤 微生 物肥 力评 价因子 总集 计算各 指标 隶属 度 6.2.1 函数模 型选 择及 隶属 度计 算 S(2)()=0,01,0(2)()0 6.2.2 隶属函 数阈 值上 限的 确定 u1,u2,.un u0 u0 m m/n u0 75%土壤微 生物 肥力 指数 模型 Ci Fi(3)DB15/T 3609 2024 5 MIF=(3)MIF i i 土壤微 生物 肥力 综合 评价 6.2.2(2)(3)MIF 0 1 MIF DB15/T 3609 2024 6 A A 附录A（资料 性）微生物 生物 量测 定 A.1 土壤微 生物 量碳 的测 定 A.1.1 方法原 理 24 h A.1.2 试剂配 制 A.1.2.1 CHCl3 1:2 1 min 3 4 A.1.2.2 1 mol/L 40 g 0.01 g 1000 mL A.1.2.3 0.5 mol/L 174.26 g 0.01 g 2.5 L 2 L 150 r/min A.1.2.4 0.2500 mol/L 12.26 g 0.0001 g 600 mL 800 mL 1000 mL A.1.2.5 0.05 mol/L 14 g 0.0001 g 600 mL 800 mL 5 mL 1000 mL A.1.2.6 1.49 g 0.0001 g 0.7 g 0.0001 g 1 g 0.0001 g 100 mL 注：A.1.3 仪器设 备 0.0001 g 0.01 g 180 5)25 1)25 150 r/min 300 r/min A.1.4 水分测 定 HJ 613 A.1.5 样品测 定 4()()2 mm 40%40%25 1 7 d 15 d 100%1 mol/LNaOH DB15/T 3609 2024 7 CO2 4 24 h A.1.6 熏蒸 50.00 g 3 100 mL 2/3 2 3 0.5 mm 1 mol/LNaOH CO2-0.07 MPa 3 min 5 min 25 1 24 h-0.07 Ma 5 6 3 min 3 A.1.7 浸提 200 mL 100 mL 0.5 mol/L 1:2 g mL 25,300 r/min 30 min 100 mL 3 200 mL 100 mL 0.5 mol/L 3-18 A.1.8 测定 10 mL 5.00 mL 0.2500 mol/L 5.00 mL 175 185 175 185,5 min 250 mL 50 mL 60 mL 3-A.1.9 结果计 算 g/kg A.1=(0)0.0031.10 1000100 1(A.1)C g/kg C moL/L V0 mL V mL DB15/T 3609 2024 8 0.003 1/4 g/mmol 1.10 m g f%V1 mL g/kg A.2=(A.2)Bc g/kg Ec g/kg K 0.45 A.1.10 精密度 10%A.2 土壤微 生物 量氮 的测 定 A.2.1 方法原 理 24 h A.2.2 试剂配 制 A.2.2.1 CHCl3 A.1.2 A.2.2.2 1 mol/L 40 g 0.01 g 1000 mL A.2.2.3 0.5 mol/L 174.26 g 0.01 g 2.5 L 2 L 150 r/min A.2.2.4 400 g/L 400 g 1 L A.2.2.5 20 g/L 20 g 1 L A.2.2.6 0.02 mol/L 5.56 mL 800 mL 1000 mL 0.1 mol/L GB/T 601 5 0.02 mol/L A.2.2.7 0.10 g 0.50 g 100 mL 95%A.2.3 仪器设 备 0.0001 g 0.01 g 25 1)25 150 r/min 300 r/min A.2.4 水分测 定 DB15/T 3609 2024 9 A.1.4 A.2.5 样品测 定 A.1.5 A.2.6 熏蒸 A.1.6 A.2.7 浸提 A.1.7 A.2.8 消化 10.0 mL 250 mL 0.100 g 5 mL 3 h A.2.9 测定 15 min 25 mL 20 g/L 3 35 mL 400 g/L 5 min 0.02 mol/L A.2.10 结果计 算 g/kg A.3 N=(1 0)0.014 1000100 2(A.3)N g/kg V1 mL V0 mL c moL/L 0.014 g/mmol m g f%V2 mL g/kg A.4=(A.4)Bc g/kg Ec g/kg K 0.45 DB15/T 3609 2024 10 A.2.11 精密度 A.1.10 DB15/T 3609 2024 11 B B 附录B（资料 性）土壤酶 活性 的测 定 B.1 土壤蔗 糖酶 活性 测定 B.1.1 方法原 理 3,5-3-5-B.1.2 试剂配 制 a)C7H8 b)C12H22O11 c)Na2HPO4 d)KH2PO4 e)C6H12O6 f)3,5-C7H4N2O7 g)KNaC4H4O6 4H2O h)1)80 g/L 8.00 g 100 mL 2)pH 5.5 3)11.876 g 1 L A 9.078 g 1 L B A 0.5 mL B 9.5 mL i)1 mg/mL 98 100 2 h 50 mg 50 mL 4 7 d j)3,5-DNS 0.50 g3,5-20 mL 2 mol/L 50 mL 30 g 100 mL 7 d B.1.3 仪器设 备 0.0001 g 0.01 g B.1.4 标准曲 线绘 制 1 mg/mL 0.00 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 mL 50 mL 1 mL DNS 3 mL 5 min 50 mL 540 nm B.1.5 测定步 骤 DB15/T 3609 2024 12 B.1.5.1 水分测 定 HJ 613 B.1.5.2 样品测 定 5 g 0.0001 g 50 mL 15 mL 80 g/L 5 mL pH5.5 5 37 1 24 h 1.00 mL 50 mL 3 mL DNS 5 min 3 min 3-5-50 mL 540 nm:a)80 g/L b)c)B.1.6 结果计 算 24 h 1 g B.1=(1 2)(B.1)X 24 h mg/g 24 h c1 mg/mL c2 mg/mL V mL N=mL mL m g f%t 24 24 h B.1.7 精密度 10%B.2 土壤脲 酶活 性测 定 B.2.1 方法原 理 B.2.2 试剂配 制 B.2.2.1 C7H8 B.2.2.2 CON2H4 DB15/T 3609 2024 13 B.2.2.3 C6H8O7 B.2.2.4 KOH B.2.2.5 C6H5ONa B.2.2.6 0.9%B.2.2.7 100 g/L 10 g 100 mL B.2.2.8 pH 6.7 184 g 147.50 g 1 mol/L pH 6.7 1000 mL B.2.2.9 1.35 mol/L 62.50 g 2 mL 18.5 mL 100 mL A 27 g 100 mL B A B 4 A B 20 mL 100 mL B.2.2.10 0.4717 g 105 3 h 1000 mL 1 mL 0.1 mg 10 0.01 mg/mL B.2.3 仪器设 备 0.0001 g 0.01 g B.2.4 标准曲 线绘 制 0.00 1.00 3.00 5.00 7.00 9.00 11.00 13.00 mL 50 mL 20 mL 4 mL 3 mL 20 min 0.0 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 g/mL 1 h 578 nm B.2.5 测定步 骤 B.2.5.1 水分测 定 HJ 613 B.2.5.2 样品测 定 5 g 0.0001 g 100 mL 1 mL 15 min 10 mL 100 g/L 20 mL pH 6.7 37 1 24 h 1.00 mL 50 mL 4 mL 3 mL 20 min 50 mL 1 h 578 nm 1 h:a)100 g/L b)c)B.2.6 结果计 算 DB15/T 3609 2024 14 24 h 1 g B.2 X=(1 2)1000(B.2)X mg/g 24 h c1 c2 V mL N=mL mL m g f%t 24 24 h B.2.7 精密度 10%B.3 土壤磷 酸酶 活性 测定 B.3.1 方法原 理 B.3.2 试剂配 制 a)C7H8 b)C2H4O2 c)C2H3O2Na d)C6H8O7 e)Na2HPO4 f)Na2B4O7 10H2O g)NaOH h)Al2(SO4)3 i)C6H5Na2PO4 j)C6H6O k)C6H2Br2CLNO l)pH 5.0 1)0.2 mol/L 11.55 mL 1 L 2)0.2 mol/L 16.40 g 1 L 3)14.80 mL 0.2 mol/L 35.20 mL 0.2 mol/L 1 L m)pH 7.0 1)0.1 mol/L 19.20 g 1 L DB15/T 3609 2024 15 2)0.2 mol/L 53.63 g 71.70 g 1 L 3)6.40 mL 0.1mol/L 43.60 mL 0.2 mol/L 100 mL n)pH 9.6 1)0.05 mol/L 19.05 g 1 L 2)0.2 mol/L 8.00 g 1 L 3)50 mL 0.05 mol/L 23 mL 0.2 mol/L 200 mL o)5 g/L 5.00 g 1 L p)0.125 g 10 mL 96%4 q)3 g/L 3.00 g 1 L r)1 mg/mL 1)1 g 0.0001 g 1 L 2)0.01 mg/ml 10.00 mL 1 L B.3.3 仪器设 备 0.0001 g 0.01 g B.3.4 标准曲 线绘 制 0.00 1.00 3.00 5.00 7.00 9.00 11.00 13.00 mL 0.01 mg/ml 50 mL 5 mL 4 0.0 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 g/mL 30 min 660 nm B.3.5 测定步 骤 B.3.5.1 水分测 定 HJ 613 B.3.5.2 样品测 定 5 g 0.0001 g 100 mL 2.5 mL 15 min 20 mL 5 g/L 37 1 24 h 100 mL 3 g/L 3.00 mL 50 mL 660 nm 注1：注2：注3：B.3.6 结果计 算 DB15/T 3609 2024 16 24 h 1 g mg B.3 X=(1 2)1000(B.3)X 24 mg/g 24 h c1 c2 V mL N=mL mL m g f%t 24 24 h B.3.7 精密度 10%B.4 土壤过 氧化 氢酶 活性 测定 B.4.1 方法原 理 4 B.4.2 试剂配 制 B.4.2.1 C7H8 B.4.2.2 H2SO4 B.4.2.3 H2O2 B.4.2.4 K2MnO4 B.4.2.5 0.2 mol/L 5.43 mL 400 mL 500 mL 4 B.4.2.6 c 1/5K2MnO4=0.1 mol/L 3.30 g 1050 mL 15 min GB/T 601 B.4.2.7 3%30%25 mL 250 mL 3%4 0.1 mol/L 1.00 mL 3%50 mL 5 mL 5 mL 0.2 mol/L 0.1 mol/L 16.51 mL 注：16.51 mL 3%3%B.4.3 仪器设 备 0.0001 g 0.01 g B.4.4 测定步 骤 DB15/T 3609 2024 17 B.4.4.1 水分测 定 HJ 613 B.4.4.2 样品测 定 5 g 0.0001 g 0.5 mL 4 30 min 25 mL4 3%4 1 h 25 mL 4 0.2 mol/L 1.00 mL 50 mL 5 mL 5 mL 0.2 mol/L 0.1 mol/L B.4.5 结果计 算 1 h 1 g 0.1 mol/L B.4 X=(0)(B.4)X mL/g h V mL c 1/5 mol/L m g f%t 1 1 h B.4.6 精密度 10%B.5 土壤硝 酸还 原酶 活性 测定 B.5.1 方法原 理 NO3-NO2-NH2OH NH4+B.5.2 试剂配 制 B.5.2.1 1%KNO3 B.5.2.2 1%B.5.2.3 CaCO3 B.5.2.4 B.5.2.5 3 g 37 g(20.1 mL)H2SO4 6 h B.5.2.6 10%NaOH B.5.2.7 KNO3 16.3052 g KNO3 1 L(1 mL 10 mg DB15/T 3609 2024 18 NO3-N)(1 mL 0.1 mg NO3-N)B.5.3 仪器设 备 100 mL B.5.4 标准曲 线绘 制 50 mL KNO3 2 mL 10 min15 mL 500 mL(1 mL 0.01 mg NO3-N)5 mL 40 mL 50 mL 10%NaOH 400 nm 500 nm B.5.5 测定步 骤 1 g 1 mm 100 mL 20 mg CaCO3 1 mL 1%KNO3 1 mL()3 min 30 24 h 50 mL 1 mL 20 mL 1 mL 10 min 15 mL 10%NaOH 50 mL(450 nm)(180 3 h)B.5.6 结果计 算 24 h 10 g NO3-N mg NO3-N/(10 g 24 h)=(m0-m)10/dwt m0 mg m mg dwt g B.6 土壤多 酚氧 化酶 活性 测定 B.6.1 方法原 理 L-DOPA B.6.2 试剂配 制 B.6.2.1 50 mmol/L pH 7 6.804 g 800 mL 12 mol/L pH=6.5 1.25 mL 1 L 4 8 d B.6.2.2 50 mmol/L pH 7 5.3 g 800 mL pH=8.0 1 L 4 8 d B.6.2.3 L-DOPA(25 mmol/L)0.4929 g L-DOPA 100 mL 90 B.6.3 仪器设 备 250 mL 96 B.6.4 测定步 骤 DB15/T 3609 2024 19 B.6.4.1 1 g 250 mL 125 mL 50 mmol/L pH 7 50 mmol/L pH 7 180 r/min 30 min 5 g 5 B.6.4.2 200 L 96 50 L 200 mol/L B.6.4.3 200 L 50 L pH 7 50 L pH 7 200 L pH 7 200 L pH 7 50 L B.6.4.4 96 20 18 h 450 nm B.6.5 结果计 算 nmol g-1h-1=mL/7.9 mol mL h g=-