香菇菌种制作技术规程DB15／T 1056—2024.pdf

ICS 65.020.21 CCS B 30 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 1056 2024 代替DB15/T 1056-2016 香菇菌种 制作技术 规程 Regulation of strain manufacture for lentinula edodes 2024-07-31 发布 2024-08-31 实施 内蒙古自 治区市 场 监督管理 局 发 布 DB15/T 1056 2024 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分：标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定起草。本文件 代替DB15/T 1056-2016 香 菇菌 种制 作技 术规 程，与DB15/T 1056-2016 相比，除结 构调 整和编辑 性改 动外，主 要技 术变化 如下：a)更改了 母种 培养 基要 求（见 5.1，2016 版 5.1）；b)增加了 母种 容器 要求（见5.2，2016 版 5.2）；c)增加了 母种 检测 要求（见5.4）；d)更改了 母种 培养 要求（见5.6，2016 版 5.5）；e)更改了 原种、栽 培种 培养 基要求（见 6.1.1，2016 版 6.1.1）；f)更改了 原种、栽 培种 培养 要求（见 6.1.6，2016 版6.1.6）；g)更改了 原种、栽 培种 贮存 要求（见 6.1.7，2016 版6.1.7）；h)增加了 瓶装 液体 菌种 检验 要求（见 6.2.2.4）；i)更改了 菌种 罐液 体菌 种装 罐和灭 菌要 求（见 6.2.3.1，2016 版6.2.3.1）；j)更改了 母种、原 种、栽 培种 感官要 求（见 7.1.1、7.1.2、7.1.3，2016 版7.1.1、7.1.2、7.1.3）；k)更改了 入库 要求（见 7.2，2016 版 7.2）；l)删除了 留样 要求（见 2016 版 7.3）。本文件 由内 蒙古 自治 区农 牧厅提 出。本文件 由内 需古 自区 果蔬 标准化 技木 委会（SAM/TC 25）归 口。本文件 起草 单位：内蒙 古 自治区 农牧 业科 学院、克 什克腾 旗农 牧技 术推 广中 心、清水 河县 摇铃 沟农业科技 发展 有限 公司。本文件 主要 起草 人：李亚 娇、王 海燕、孙 国琴、于 传宗、庞杰、王 永、杨景 杰、李 炳华、吴 静、李松树叶、狄 洁增、吕 永伟、苏永 梅、赵宏 宇、刘晓 蕊、刘 瑞。本文件 及其 所代 替文 件的 历次版 本发 布情 况为：2016 年首 次发 布为 DB15/T 1056-2016；本次为 第一 次修 订。DB15/T 1056 2024 1 香 菇菌种 制作技术 规程 1 范围 本文件 规定 了香 菇 菌 种制 作的 菌 种生 产要 求、母种 生产、原种 和栽 培种 生产、检验、入 库等 技术 流程要点。本文件 适用 于香 菇母 种、原种和 栽培 种菌 种制 作要 求。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。NY/T 1731 食 用菌 菌种 良 好作业 规范 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。香菇 lentinula edodes 又名香 蕈、香 信、香 菌、冬菇、椎茸(日本)。类脐 菇 科（Omphalotaceae）、香菇属（Lentinula）、香菇种 的一 类木 腐菌，子 实体肉 质或 近肉 质。菌种 spawn 通过生 产试 验验 证具 有特 异性、均一 性和 稳定 性，丰产性 好、抗性 强的 香菇 菌株或 品种，生 长在适宜基 质上 具结 实性 的菌 丝培养 物，包括 母种、原 种和栽 培种。母种 stock culture 经分离、杂交、诱变 等各 种 方法选 育得 到的 具有 结实 性的菌 丝体 纯培 养物 及其 继代培 养物，以玻 璃试管和 培养 皿为 培养 容器 和使用 单位，也 称为 一级 种、试 管种。原种 pre-culture spawn 由母种 移植、扩 大培 养而 成的菌 丝体 纯培 养物，也 称为二 级种。DB15/T 1056 2024 2 栽培种 spawn 由原种 移植、扩 大培 养而 成的菌 丝体 纯培 养物，栽 培种只 能用 于栽 培，不可 再次扩 大繁 殖菌 种，也称为三 级种。固体菌 种 solid spawn 以富含 木质 素、纤 维素 和 淀粉等 天然 有机 物为 主要 原料，添 加适 量的 有机 氮 源和无 机盐 类，具 有一定水分 含量 的培 养基 培养 的纯菌 丝体。液体菌 种 liquid spawn 在液体 培养 基中，通 过摇 瓶震荡 培养 或深 层发 酵技 术快速 获得 的大 量的 纯双 核菌丝 体。4 菌种生 产要 求 场地 总体要 求交 通运 输便 利，地势较 高，通风 良好，有 充足的 水源 和电 源，排水 通畅，远离 污染 源。厂房 菌种生 产厂 房要 求有 各自 隔离的 摊晒 场、原材 料库、配料分 装库。配 套有 配料 室、搅拌 室、装袋（瓶）室、灭 菌室、冷 却室、接 种 室、培 养室（通 风好，有 纱 窗）、菌种 检测 室及 菌种 冷 藏库等 各环 节的 设施。冷却室、接 种室，培 养室 都要有 净化 设施。菌 种生 产厂房 条件 符合 NY/T 1731 规定。生产设 备 菌种生 产需要 粉碎 机、电 子秤、搅拌机、装 袋（瓶）机、高压灭 菌锅 或常压 灭菌锅、离子 净化 器、超净工 作台 或接 种箱、恒 温培养 箱、培养 架、摇床、液体 菌种 灌（30 L 250 L）、冰 箱、显微 镜等 设备。菌 种生 产设 备条 件符 合 NY/T 1731 规 定。5 母种生 产 培养基 马铃薯200 g 加水1200 ml 煮沸20 min，滤液 定容 至1000 ml，加入 葡萄 糖10 g、蔗糖10 g、蛋白 胨1.5 g、酵 母粉1.5 g、硫 酸镁（MgSO4）0.5 g、磷 酸 二氢钾（KH2PO4）1 g、琼 脂粉8 g 10 g，pH 自 然；麦粒100 g 加水1200 ml 煮沸20 min，滤 液定 容至1000 ml，加 入葡 萄糖10 g、蔗糖10 g、蛋 白胨5 g、硫 酸镁（MgSO4）0.5 g、磷酸 二氢 钾（KH2PO4）1 g、琼 脂粉8 g 10 g，pH 自然；马铃薯200 g 加水600 ml煮沸20 min，滤液 定容 至500 ml；麦 麸100 g加水600 ml 煮沸20 min，滤 液定容至500 ml，二者 混合，加 入葡萄 糖10 g、蔗糖10 g、蛋白 胨1.8 g、硫酸 镁（MgSO4）0.5 g、磷酸 二氢钾（KH2PO4）1 g、琼脂 粉8 g 10 g，pH 自 然。DB15/T 1056 2024 3 容器 试管选 用18 mm 180 mm 或者20 mm 200 mm；培养 皿 选用直 径7 cm 9 cm 玻 璃 培养皿 或一 次性 塑料培养 皿，三角 瓶规 格300 ml 500 ml。分装和 灭菌 5.3.1 试管分 装和 灭菌 分装培 养基至 试管1/4 处，用棉塞 或硅胶 塞子 封闭试 管口，每5支 试管为1把，牛皮纸 包棉塞，橡 皮筋扎紧，棉塞 向上 放置。棉 塞应采 用梳 棉，不 能使 用 脱脂棉。在121 122（0.11 MPa 0.12 MPa）下恒温 灭菌25 min。降温至（65 5）时取 出 试管，在空 气清 洁的 室内 摆斜面，斜 面长 度不 超过 试管长 度的2/3。自 然降温凝 固后 成斜 面。5.3.2 培养皿 分装 和灭 菌 培养基 装入300 ml 500 ml 三角 瓶至 刻度 的2/3 处，用带滤 膜的 封 口 膜封 口后 灭菌。培养 皿用 报 纸包好，放入 灭菌 锅。121 122（0.11 MPa 0.12 MPa）恒温 灭菌25 min。降温至（655）时，在 超净工 作台内 将三 角瓶中 的培养 基分装 至培 养皿中，培养 基占培 养皿 高度的1/3 1/2。检测 抽取3%5%灭菌 后的 试管 和培养 皿，在28 下培 养48 h，无微 生物 长出 为灭 菌合格。接种 超净工 作台 或接 种箱 内紫 外灯照 射30 min 后 吹风，之后用75%酒精 进行 表面 消 毒。接 菌过 程严 格执行无菌 操作，接 种后 及时 贴好标 签并 做好 记录。将3 mm 5 mm 菌 块接 种在 培养皿 或试 管培 养基 的中 部。培 养皿 用石 腊膜 密封。培养 在通风 避光、22 26 下培 养。接种后 每隔2 d 3 d 检验 一次，剔除 菌种 未活、污 染和生 长不 良的 不合 格培 养物。菌丝长 满培 养基 表面 即可 使用。6 原料、栽培 种生 产 固体菌 种 6.1.1 培养基 粮食培 养基：谷粒、麦粒 或玉米 粒89%，柠条 粉、棉 籽壳、木屑、玉米 芯粉或 豆秸粉9%，石 膏1%、过磷酸 钙%，水 分含 量（602）%，石 灰水 调节pH 6.0 pH 6.6。组合培 养基：木屑78%，麦 麸或细 米糠20%，石 膏1%，过磷酸 钙1%，水 分含 量（60 2）%，石灰 水调节pH值到6 6.6；柠条粉60%，玉米芯20%，麸子18%，石膏1%，过磷 酸 钙1%，水分含 量（60 2）%，石灰 水调 节pH值到66.6；DB15/T 1056 2024 4 豆秸粉60%，玉米芯20%，麸子18%，石膏1%，过磷 酸 钙1%，水分含 量（60 2）%，石灰 水调 节pH值到66.6；硬杂木 屑87%，麦麸12%，石膏1%，水 分含 量（60 2）%，石灰 水调 节pH 值到6 6.6；硬杂木 屑84%，麸皮12%，高粱壳3%，石膏1%，水 分 含量（602）%，石 灰水 调节pH 值到66.6。6.1.2 容器 原种选 用耐126 高 温、有透气 膜封 口的 透明 瓶子，或 选用（12 17）cm（22 28）cm（0.04 0.05）mm的 聚丙 烯塑 料袋。栽培种 选用（15 17）cm（33 35）cm（0.04 0.05）mm 的聚 丙烯 塑料 袋。6.1.3 装袋（瓶）采用装 袋（瓶）机 或人 工进 行装袋（瓶），人工 装袋（瓶）需 用打 孔器 在袋 口处 打孔，孔直 径1 cm 1.5 cm 深 度为8 cm 12 cm，每袋（瓶）装 培养 基500 g 600 g。塑料 袋用 无棉 盖体套 环封 口。培养 基质装袋（瓶）后4 h 内进 行 灭菌。6.1.4 灭菌 高压灭 菌：组合 培养 基在121 122（0.11 MPa 0.12 MPa）下灭菌2 h；粮食 培养基 在121 122（0.11M Pa 0.12 M Pa）下灭 菌2.5 h。常压灭 菌：在3 h 之 内使 温 度升至100，恒温 保持100 10 h 12 h。6.1.5 接种 超净工 作台 或接 种箱 内接 种。每 个原种 袋（瓶）接 入2 cm 3 cm 大 小母 种1 2块；每 个栽 培种 袋接入原种 量不 应少 于15 g。每批接 种应为 单一 品种，如中途 换品种 时采 用75%酒 精对超 净工作 台或 接种箱 及接种 工具进 行表 面擦拭消 毒。6.1.6 培养 通风避 光、22 27 下培养。6.1.7 贮存 原种和 栽培 种0 4 下贮存，贮 存期 不超 过50 d。液体菌 种生 产 6.2.1 培养基 不加琼 脂，其他 同5.1。6.2.2 瓶装液 体培 养基 生产 6.2.2.1 装瓶 采用150 ml 500 ml 三角 瓶，培 养基 添加 至刻 度的2/3 处，用带 滤膜 的封 口膜 封口后 灭菌。6.2.2.2 灭菌 在121 122（0.11 MPa 0.12 MPa）保 持25 min。DB15/T 1056 2024 5 6.2.2.3 接种和 培养 取3 mm 5 mm 大 小母 种10 15块 接入30 以下 的液 体培养 基中，培 养温 度在23 25，130 r/min 160 r/min 下 振荡 培养6 d 10 d。6.2.2.4 检验 接种后 第3 天对 三角 瓶逐 个 进行纯 度检 验，及时 清理 未活或 污染 的培 养物。6.2.3 菌种罐 液体 菌种 生产 条件 6.2.3.1 装罐和 灭菌 将液体 培养 基装 至菌 种罐 体积的2/3 进行 灭菌，在121 下 灭菌 40 min。待 液体 培养基 冷却 至30 以下时 进行 接种。6.2.3.2 接种和 培养 将培养 好的 三角 瓶液 体菌 种接入 到菌 种罐 中，接种 量 为培养 基总 体积 的8%10%，在 21 25，140 r/min 180 r/min，灌压0.04 MPa，下培 养5 d 7 d。液体菌 种可 作为 原种 或栽 培种使 用，液体 菌种 接种 在出菇 袋中 要采 用专 用液 体菌种 接种 枪进 行，严格执行 无菌 操作，每 袋接 种10 ml 15 ml。7 检验、入库 检验 7.1.1 母种感 官要 求 香菇母 钟感 官要 求见 表1。表1 香菇母 种感 官要 求 项目 要求 容器 完整、无损、洁净 棉塞或无棉盖体 干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和过滤要求 培养基灌入量 为试管总容积的1/4，培养皿高 度的1/31/2 菌种外观 菌丝生长量 长满斜面或培养皿 菌丝体特征 洁白、平整、无角变 菌丝体分泌物 无 菌落边缘 整齐 杂菌菌落 无 斜面背面外观 培养基不干缩，颜色均匀，无暗斑、无色素 7.1.2 原种感 官要 求 DB15/T 1056 2024 6 香菇 原 种感 官要 求见 表 2。表2 香菇 原 种感 官要 求 项目 要求 容器 完整、无损、洁净 棉塞或无棉盖体 干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和滤菌要求 培养基上表面距瓶（袋）口的距离（505）mm 菌种外观 菌丝生长量 长满容器 菌丝体特征 洁白浓密、生长旺健、整齐 培养物表面菌丝体 生长均匀、无高温抑制线 培养基及菌丝体 紧贴瓶壁、无干缩 菌丝分泌物 无或少量无色至棕黄色水珠 杂菌菌落 无 子实体原基 无 7.1.3 栽培种 感官 要求 香菇栽 培种 感官 要求 见 表3。表3 香菇栽 培种 感官 要求 项目 要求 容器 完整、无损、洁净 棉塞或无棉盖体 干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和滤菌要求 培养基上表面距瓶（袋）口的距离（50 5）mm 菌 种 外 观 菌丝生长量 长满容器 菌丝体特征 生长均匀、色泽一致、无角变、无高温抑制线 培养基及菌丝体 紧贴瓶壁、无干缩 菌丝分泌物 无、允许少量无色至棕黄色水珠 杂菌菌落 无 子实体原基 无 7.1.4 液体菌 种感 官要 求 香菇液 体菌 种种 感官 要求 见表 4。DB15/T 1056 2024 7 表4 香菇液 体菌 种种 感官 要求 项目 要求 容器 完整、无损、洁净 菌丝生长量 培养基 1/2 1/3 菌丝体特征 白色至透明块状、生长旺健 培养基及菌丝体 清澈、无杂色 杂菌 无 入库 菌种检 验完 成后 及时 入菌 种库，详细 记录 各生 产环 节，菌 种库 温度0 4，避 光，适当 通风，定期对 空间 进行 杀菌 处理。