野生食用菌菌种制作技术规程DB15／T 1060—2024.pdf

ICS 65.020.21 CCS B 30 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 1060 2024 代替DB15/T 1060 2016 野生食用 菌菌种制 作技术规 程 Regulation of strain manufacture for wild edible fungi 2024-07-31 发布 2024-08-31 实施 内蒙古自 治区市 场 监督管理 局 发 布 DB15/T 1060 2024 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分：标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定起草。本文件 代替DB15/T 1060 2016 野生菌 菌种 制作 技 术规程，与DB15/T 1060 2016 相比，除结 构调整和 编辑 性改 动外，主 要技术 变化 如下：a)更改了 范围 要求（见 第 1 章，2016 版第1 章）；b)更改了 母种 培养 基要 求（见 5.1，2016 版 5.1）；c)增加了 母种 检测 要求（见5.4）；d)更改了 母种 培养 要求（见5.6，2016 版 5.5）；e)更改了 原种、栽 培种 培养 基要求（见 6.1，2016 版6.1）；f)更改了 原种、栽 培种 培养 要求（见 6.1.5，2016 版6.1.5）；g)更改了 原种、栽 培种 贮存 要求（见 6.1.6，2016 版6.1.6）；h)更改了 母种、原 种、栽 培种 感官要 求（见 7.1.1、7.1.2、7.1.3，2016 版7.1.1、7.1.2、7.1.3）；i)更改了 入库 要求（见 7.2，2016 版 7.2）；j)删除了 留样 要求（见 2016 版 7.3）。本文件 由内 蒙古 自治 区农 牧厅提 出。本文件 由内 需古 自区 果蔬 标准化 技木 委会（SAM/TC 25）归 口。本文件 起草 单位：内 蒙古 自治区 农牧 业科 学院、杭 锦旗 农 牧技 术推 广中 心。本文件 主要 起草 人：孙 国 琴、李亚 娇、王海 燕、于传 宗、庞杰、王 永、王宇 胜、乌仁塔 娜、杨 景杰、李炳华、李 松树 叶、海旭 冉、张 雪梅、狄 洁增、赵 宏宇、刘晓 蕊。本文件 及其 所代 替文 件的 历次版 本发 布情 况为：2016 年首 次发 布为 DB15/T 1060 2016；本次为 第一 次修 订。DB15/T 1060 2024 1 野生食用 菌菌种 制作技术 规程 1 范围 本文件 规定 了野 生菌 食用 菌的菌 种生 产要 求、母种 生产、原种 和栽 培种 生产、检验、入 库等 技术 流程要点。本文件 适用 于蒙 古口 蘑、白鳞蘑 菇、蘑菇、田野 蘑 菇、大 肥蘑 菇、大 白桩 菇、香杏 丽蘑、花脸 香蘑可食用 野生 菌母 种、原种 和栽培 种菌 种制 作要 求。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。NY/T 1731 食 用菌 菌种 良 好作业 规范 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。野生食 用菌 wild edible fungi 能够形 成大 型肉 质或 胶质 的子实 体或 菌核 类组 织并 能供人 们食 用或 药用 的一 类大型 真菌。菌种 spawn 生长在 适宜 基质 上具 结实 性的菌 丝培 养物，包 括母 种、原 种和 栽培 种。母种 stock culture 经分离、杂交、诱变 等各 种 方法选 育得 到的 具有 结实 性的菌 丝体 纯培 养物 及其 继代培 养物，以玻 璃试管和 培养 皿为 培养 容器 和使用 单位，也 称为 一级 种、试 管种。原种 pre-culture spawn 由母种 移植、扩 大培 养而 成的菌 丝体 纯培 养物，也 称为二 级种。DB15/T 1060 2024 2 栽培种 spawn 由原种 移植、扩 大培 养而 成的菌 丝体 纯培 养物，栽 培种只 能用 于栽 培，不可 再次扩 大繁 殖菌 种，也称为三 级种。固体菌 种 solid spawn 以富含 木质 素、纤 维素 和 淀粉等 天然 有机 物为 主要 原料，添 加适 量的 有机 氮 源和无 机盐 类，具 有一定水分 含量 的培 养基 培养 的纯菌 丝体。4 菌种生 产要 求 场地 总体要 求交 通运 输便 利，地势较 高，通风 良好，有 充足的 水源 和电 源，排水 通畅，远离 污染 源。厂房 菌种生 产厂 房要 求有 各自 隔离的 摊晒 场、原材 料库、配料分 装库。配 套有 配料 室、搅拌 室、装袋（瓶）室、灭 菌室、冷 却室、接 种 室、培 养室（通 风好，有 纱 窗）、菌种 检测 室及 菌种 冷 藏库等 各环 节的 设施。冷却室、接 种室，培 养室 都要有 净化 设施。菌 种生 产厂房 条件 符合NY/T 1731 规定。生产设 备 菌种生 产需要 粉碎 机、电 子秤、搅拌机、装 袋（瓶）机、高压灭 菌锅 或常压 灭菌锅、离子 净化 器、超净工 作台 或接 种箱、恒 温培养 箱、培养 架、摇 床、冰箱、显微 镜等 设备。菌种生 产设 备条 件符 合NY/T 1731 规 定。5 母种生 产 培养基 马铃薯200 g 加水1200 ml 煮沸20 min，滤液 定容 至1000 ml，加入 葡萄 糖10 g、蔗糖10 g、蛋白 胨1.6 g、酵母 粉1.6 g、硫 酸镁（MgSO4）0.5 g、磷酸 二氢钾（KH2PO4）1 g、琼 脂粉8 g 10 g，pH 自 然；麦粒100 g 加水1200 ml 煮沸20 min，滤 液定 容至1000 ml，加 入葡 萄糖10 g、蔗糖10 g、蛋 白胨5 g、硫 酸镁（MgSO4）0.5 g、磷酸 二氢 钾（KH2PO4）1 g、琼 脂粉8 g 10 g，pH 自然；马铃薯200 g 加水600 ml煮沸20 min，滤液 定容 至500 ml；麦 麸100 g加水600 ml 煮沸20 min，滤 液定容至500 ml，二者 混合，加 入葡萄 糖10 g、蔗糖10 g、蛋白 胨2 g、硫 酸镁（MgSO4）0.5 g、磷 酸二 氢钾（KH2PO4）1 g、琼 脂粉8 g 10 g，pH自 然。容器 试管选 用18 mm 180 mm 或者20 mm 200 mm；培养 皿 选用直 径7 cm 9 cm 玻 璃 培养皿 或一 次性 塑料培养 皿。分装和 灭菌 5.3.1 试管分 装和 灭菌 DB15/T 1060 2024 3 分装培 养基至 试管1/4 处，用棉塞 或硅胶 塞子 封闭试 管口，每5支 试管为1把，牛皮纸 包棉塞，橡 皮筋扎紧，棉塞 向上 放置。棉 塞应采 用梳 棉，不 能使 用 脱脂棉。在121 122（0.11 MPa 0.12 MPa）下恒温 灭菌25 min。降温至（65 5）时取 出 试管，在空 气清 洁的 室内 摆斜面，斜 面长 度不 超过 试管长 度的2/3。自 然降温凝 固后 成斜 面。5.3.2 培养皿 分装 和灭 菌 培养基 装入300 ml 500 ml 三角 瓶至 刻度 的2/3 处，用带滤 膜的 封口 膜封 口后 灭菌。培养 皿用 报 纸包好，放入 灭菌 锅。121 122（0.11 MPa 0.12 MPa）恒温 灭菌25 min。降温至（655）时，在 超净工 作台内 将 三 角瓶中 的培养 基分装 至培 养皿中，培养 基占培 养皿 高度的1/3 1/2。检测 抽取3%5%灭菌 后的 试管 和培养 皿，在28 下培 养48 h，无微 生物 长出 为灭 菌合格。接种 超净工 作台 或接 种箱 内紫 外灯照 射30 min 后 吹风，之后用75%酒精 进行 表面 消 毒。接 菌过 程严 格执行无菌 操作，接 种后 及时 贴好标 签并 做好 记录。将3 mm 5 mm 菌 块接 种在 培养皿 或试 管培 养基 的中 部。培 养皿 用石 腊膜 密封。培养 在通风 避光、20 30 下培 养。接种后 每隔2 d 3 d 检验 一次，剔除 菌种 未活、污 染和生 长不 良的 不合 格培 养物。菌丝长 满培 养基 表面 即可 使用。6 原料、栽培 种生 产 固体菌 种 6.1.1 培养基 粮食培 养基：谷粒、麦粒 或玉米 粒90%，柠条 粉、棉 籽壳、玉米芯 粉或 豆秸粉9%，石膏1%，水分含量（60 2）%，石灰 水调 节pH 7.5 pH 8.5。组合培 养基：柠 条粉80%，麸皮19%，石膏1%，水分 含 量（60 2）%，石灰 调节pH 7.5 pH 8.5；柠条粉60%，玉 米芯20%，麸皮19%，石膏1%，水分 含量（602）%，石 灰调 节pH 7.5 pH 8.5；麦粒60%，柠条 粉20%，麸 皮19%，石 膏1%，水 分含 量（60 2）%，石灰 调节pH 7.5 pH 8.5；柠条粉60%，玉 米芯20%，麸子19%，石膏1%，水分 含 量（60 2）%，石灰 水调 节pH 7.5 pH 8.5。6.1.2 容器 原种选 用耐126 高 温、有透气 膜封 口的 透明 瓶子，或 选用（12 17）cm（22 24）cm（0.04 0.05）mm的 聚丙 烯塑 料袋。栽培种 选用（15 17）cm 24 cm（0.04 0.05）mm的聚 丙烯 塑料 袋。6.1.3 装袋（瓶）DB15/T 1060 2024 4 采用装 袋（瓶）机 或人 工进 行装袋（瓶），人工 装袋（瓶）需 用打 孔器 在袋 口处 打孔，孔直 径1 cm 1.5 cm 深 度为8 cm 12 cm，每袋（瓶）装 培养 基500 g 600 g。塑料 袋用 无棉 盖体套 环封 口。培养 基质装袋（瓶）后4 h 内进 行 灭菌。6.1.4 灭菌 高压灭 菌：组合 培养 基在121 122（0.11 MPa 0.12 MPa）下灭菌2 h；粮食 培养基 在121 122（0.11 M Pa 0.12 M Pa）下 灭菌2.5 h。常压灭 菌：在3 h 之 内使 温 度升至100，恒温 保持100 10 h 12 h。6.1.5 接种 超净工 作台 或接 种箱 内接 种。每 个原种 袋（瓶）接 入2 cm 3 cm 大 小母 种1 2块；每 个栽 培种 袋接入原种 量不 应少 于15 g。每批接 种应为 单一 品种，如中途 换品种 时采 用75%酒 精对超 净工作 台或 接种箱 及接种 工具进 行表 面擦拭消 毒。6.1.6 培养 通风避 光、21 27 下培养。6.1.7 贮存 原种和 栽培 种0 4 下贮存，贮 存期 不超 过50 d。7 检验、入库 检验 7.1.1 母种感 官要 求 野生食 用菌 母种 感官 要求 见表1。表1 野生食 用菌 母种 感官 要求 项目 要求 容器 完整、无损、洁净 棉塞或无棉盖体 干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和过滤要求 菌种外观 菌丝生长量 长满斜面或培养皿 菌丝体特征 洁白、平整、无角变 菌丝体分泌物 无 菌落边缘 整齐 杂菌菌落 无 斜面背面外观 培养基不干缩，颜色均匀，无暗斑、无色素 7.1.2 原种感 官要 求 野生食 用菌 原种 感官 要求 见表 2。DB15/T 1060 2024 5 表2 野生食 用菌 原种 感官 要求 项目 要求 容器 完整、无损、无裂纹、洁净 棉塞或无棉盖体 干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和滤菌要求 培养基上表面距瓶（袋）口的距离（505）mm 菌种外观 菌丝生长量 长满容器 菌丝体特征 洁白浓密、生长旺健、整齐 培养物表面菌丝体 生长均匀、无高温抑制线 培养基及菌丝体 紧贴瓶壁、无干缩 菌丝分泌物 无 杂菌菌落 无 子实体原基 无 7.1.3 栽培种 感官 要求 野生食 用菌 栽培 种感 官要 求见 表 3。表3 野生食 用菌 栽培 种感 官要 求 项目 要求 容器 完整、无损、无裂纹、洁净 棉塞或无棉盖体 干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和滤菌要求 培养基上表面距瓶（袋）口的距离（505）mm 菌 种 外 观 菌丝生长量 长满容器 菌丝体特征 生长均匀、色泽一致、无角变、无高温抑制线 培养基及菌丝体 紧贴瓶壁、无干缩 菌丝分泌物 无或少量无色至棕黄色水珠 杂菌菌落 无 子实体原基 无 入库 菌种检 验完 成后 及时 入菌 种库，详细 记录 各生 产环 节，菌 种库 温度0 4，避 光，适当 通风，定期对 空间 进行 杀菌 处理。