大球盖菇菌种DB42／T 1839-2022.pdf

ICS 65.020 CCS B 39 DB 42 湖北省地方标准 DB42/T 1839 2022 大球盖菇 菌种 Culture of Stropharia rugosoannulata 2022-03-23 发布 2022-05-23 实施 湖 北 省 市 场 监 督 管 理 局 发 布 DB42/T 1839-2022 I 目 次 前言.III 1 范围.1 2 规 范性 引用 文件.1 3 术 语和 定义.1 4 质 量要 求.2 5 检验.5 6 标 签、标志、包 装、运 输和贮 存.6 附录A（资 料性）大球 盖菇菌 种培 养基 配方.8 DB42/T 1839-2022 III 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标准 化工 作导则 第1 部分：标准化 文件 的结构 和起草 规则 的规 定起草。请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任。本文件 由宜 昌市 农业 科学 研究院 提出。本文件 由湖 北省 农业 农村 厅归口。本文件 起草 单位：宜 昌市 农业科 学研 究院、华 中农 业大学、湖 北森 源生 态科 技股份 有限 公司。本文件 主要 起草 人：刘世 玲、申 露露、李 克彬、冯 德品、朱红、边 银丙、夏 辉、周 刚、沈祥 陵、焦海涛、施昌 华、杨迎 春、孔祥琼、周 伟、彭慧 雯。本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅，联系电话：027-87665821，邮 箱：；对 本 文 件 的 有 关 修 改 意 见 建 议 请 反 馈 至 宜 昌 市 农 业 科 学 研 究 院，联 系 电 话：0717-6671246,邮箱：。DB42/T 1839-2022 1 大 球盖菇 菌种 1 范围 本文件 规定 了大 球盖 菇（Stropharia rugosoannulata）菌 种的 术语 和定 义、质 量要求、抽 样规 则、检验方 法以 及抽 样、检验 以及标 签、标志、包 装、运输、贮存、生 产档 案等。本文件 适用 于大 球盖 菇菌 种的生 产和 储运。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB/T 191 包装 储运 图示 标志 GB/T 12728 食 用菌 术语 GB/T 37671-2019 金针 菇 菌种 NY/T 528-2010 食 用菌 菌 种生产 技术 规程 NY/T 1731-2009 食 用菌 菌 种良好 作业 规范 3 术语和 定义 GB/T 12728 界 定的 以及 下 列术语 和定 义适 用于 本文 件。母种 stock culture 经各种 方法选 育得 到的具 有结实 性的菌 丝体 纯培养 物及其 继代培 养物，以 玻 璃试管 为培养 容器 和使用单 位。也称 一级 种、试管种。来源：GB/T 12728 2006,2.5.7 原种 mother spawn 由母种 移植、扩 大培 养而 成的菌 丝体 纯培 养物。也 称二级 种。来源：GB/T 12728 2006,2.5.8 栽培种 spawn 由原种 移植、扩 大培 养而 成的菌 丝体 纯培 养物。也 称三级 种。来源：GB/T 12728 2006,2.5.9 DB42/T 1839 2022 2 固体菌 种 solid spawn 生长在 固体 培养 料上 的菌 种。来源：GB/T 12728 2006,2.5.31 液体菌 种 liquid spawn 生长在 液体 培养 基里 的菌 种。锁状联 合 clamp connection 一种锁 状桥 接的 菌丝 结构,是异 宗结 合担 子菌 次生 菌丝的 特征。来源：GB/T 12728 2006,2.2.5 拮抗现 象 antagonism 具有不 同遗 传基 因的 菌落 间互相 抑制 产生 不生 长区 带或形 成不 同形 式线 形边 缘的现 象。来源：GB/T 12728 2006,2.3.21 生物学 效率 biological efficiency 单位质 量培 养料 的风 干物 质所培 养产 生出 的子 实体 或菌丝 体质 量（鲜重），常 用百分 数表 示。如 风干料100 kg 产生 了新 鲜子 实体50 kg，即 生物 学效 率50%。来源：GB/T 12728 2006,2.1.27 摇瓶液 体菌 种 liquid spawn culturing by Erlenmeyer flask on a shaker 由母种 接种 到摇 瓶液 体培 养基中 在摇 床上 震荡 扩大 培养而 成的 菌丝 体纯 培养 物。发酵罐 液体 菌种 liquid spawn culturing by fermentation tank 由 摇 瓶 液体 菌 种或 者 种子发 酵 罐 液体 菌 种接 种 到发酵 罐 液 体 培 养 基中 扩 大培养 而 成 的菌 丝 体纯 培养物。4 质量要 求 菌种分 类 根据来 源、繁殖 代数 与生 产目的，大 球盖 菇菌 种分 为母种、原 种、栽培 种；根据培 养基 质的 形态，分为固 体菌 种和 液体 菌种。母种 DB42/T 1839-2022 3 4.2.1 容器规 格应 符 合NY/T 528-2010 中 4.7.1.2 的 规定。4.2.2 感官要 求应 符合 表 1 规定。表1 母种感 官要 求 项目 要求 检验方法 容器 洁净、透明、完整、无损 肉眼观察 棉塞或硅胶塞 干燥、洁净，松紧适度，能满足透气和滤菌要求 肉眼观察 培养基斜面长度 顶端距棉塞或硅胶塞 40 mm 50 mm 肉眼观察、测量 接种块大小（3 5）mm（3 5）mm 肉眼观察 菌种外观 菌丝生长量 长满斜面 肉眼观察、显微镜观察 菌丝体表面特征 白色、浓密，有绒毛状气生菌丝，有锁状联合，表面均匀、平整、无角变、无原基 表面分泌物 无 菌落边缘 整齐 杂菌菌落 无 肉眼观察，检测 斜面背面外观 培养基不干缩，颜色均匀、无暗斑 肉眼观察 气味 有大球盖菇菌种特有的香味，无酸、臭、霉等异味 鼻嗅 4.2.3 母种培 养条 件和 培养 时间：附录A 规 定培 养基、23 2 避光 恒温 培养，18 d 22 d 长满 斜面。4.2.4 母种栽 培性 状：母种 需经 出菇实 验，确定 种性 合格 后，方 可用 于扩 大繁 殖或 出售。原种 4.3.1 固体原 种 4.3.1.1 容器规 格应 符 合 NY/T 528-2010 中 4.7.1.3 的 规定。4.3.1.2 感官要 求应 符合 表 2 规定。表2 固体原 种感 官要 求 项目 要求 检验方法 容器 洁净、透明、完整、无损 肉眼观察 棉塞或塑料盖 干燥、洁净，松紧适度，能满足透气和滤菌要求 肉眼观察 接种物大小 12 mm 15 mm 肉眼观察 菌种外观 紧实度 菌种紧实不软散 肉眼观察 菌丝生长量 长满容器 DB42/T 1839 2022 4 表2 固体 原种 感官 要求（续）项目 要求 检验方法 菌种外观 菌丝体特征 菌丝洁白、浓密、生长均匀，无高温抑制线，无原基，无子实体。培养基及菌丝体 贴瓶（袋）壁或略有干缩 表面分泌物 无 拮抗现象 无 杂菌菌落 无 肉眼观察、检测 螨虫 无 肉眼观察、检测 气味 有大球盖菇菌种特有的香味，无酸、臭、霉等异味 鼻嗅 4.3.1.3 固体原 种培 养条 件和 培养 时间：附 录 A 规定 的培 养 基、232 避 光恒 温培 养，菌丝 长满 容器（500 mL 菌种 瓶 或500 g 菌种 袋）的时 间为55 d 60 d。4.3.2 液体菌 种（原种）4.3.2.1 摇瓶容 器规 格应 符 合 GB/T 37671-2019 中4.4.1.1 的规定。4.3.2.2 不锈钢 发酵 罐容 器宜 在温 度小于 或等 于 126，工 作 压力小 于或 等 于 0.15 Mpa 的条件 下工 作，要求压 力表、安 全阀 和各 个进出 口阀 门完 好，工作 正常；无菌 通风 换气 系统 完好，工作 正常。4.3.2.3 大球盖 菇液 体菌 种培 养基 配方采 用附 录 A 中规 定的 配方。4.3.2.4 感官要 求应 符合 表 3 规定。表3 液体菌 种感 官指 标要 求 项目 要求 检验方法 容器 洁净、完整、无损 肉眼观察 摇瓶棉塞或硅胶塞 干燥、洁净，松紧适度，能满足透气和滤菌要求 肉眼观察 培养基装量 容器的 55%65%肉眼观察 接种量 摇瓶（接种块大小）12 mm 15 mm，2 块3 块 肉眼观察 发酵罐 生物量干重是罐体装料体积的 3%5%测量 菌液外观 菌液色泽 菌丝体白色；液体清澈透亮 肉眼观察 菌液形态 有大量球状、絮状、片状菌丝体，分布均匀 肉眼观察 杂菌菌丝 无 肉眼观察，检测 气味 有大球盖菇菌种特有的香味，无酸、臭、霉、甜等异味 鼻嗅 4.3.2.5 摇瓶液 体菌 种培 养条 件和 时间：置 于摇 床上，振荡 频 率 80 次/min 120 次/min，温 度23 2，避光 培养8 d10 d。发酵罐 液体 菌种 培养 条件 和时间：通 风量 0.8 L/min 1.5 L/min、罐 压保 持 在 0.03 Mpa 0.05 Mpa之间，温 度 23 2,培养 8 d 10 d。DB42/T 1839-2022 5 栽培种 4.4.1 容器规 格应 符 合NY/T 528-2010 中 4.7.1.4 的 规定。4.4.2 感官要 求应 符合 表 4 规定。表4 栽培种 感官 要求 项目 要求 检验方法 容器 洁净、透明、完整、无损 肉眼观察 棉塞或塑料盖 干燥、洁净，松紧适度，能满足透气和滤菌要求 肉眼观察 菌种外观 菌丝生长量 长满容器 肉眼观察 菌丝体特征 洁白、浓密，生长均匀、旺盛，无高温圈现象 培养基及菌丝体 基本贴瓶（袋）壁或稍有干缩 表面分泌物 允许有少量无色水珠或棕黄色水珠 拮抗现象 无 子实体原基 无或少量 杂菌菌落 无 肉眼观察 检测 螨虫 无 肉眼观察 检测 气味 有大球盖菇菌种特有的香味，无酸、臭、霉等异味 鼻嗅 4.4.3 栽培种 培养 条件 和培 养时 间：附 录 A 中 规定 的配 方、23 2 避 光恒 温培 养，菌 丝长 满容 器（500 g 菌 种袋）时 间为55 d60 d。5 检验 抽样 母种按 品种、培 养条 件、接种时 间分 批编 号，原种（固体 原种、液 体原 种）、栽培 种按 菌种 来源、制种方 法和 接种 时间 分批 编号。按批 随机 抽取 被检 样品。固体 菌种 的母 种、原种、栽培 种的 抽样 量 分 别为该批 菌种 量的10%、5%、1%，但 每批 抽样 数量 不得 少于10 支（瓶、袋）。液 体菌种 摇瓶 菌种 的抽 样量为每批1个2个 摇瓶，液 体菌种 的发 酵罐 菌种 为每 罐100 mL500 mL。留样 固体菌 种各 级菌 种应 留样 备查，留样 的数 量应 每个 批次3支（瓶、袋）5支（瓶、袋），于 0 4 贮 存，贮存 至使 用者 在正常 生产 条件 下该 批次 菌种出 菇结 束为 止。检验 5.3.1 锁状联 合检 验 从检验 样本 中挑 取菌 丝少 许，置 于洁 净的 载玻 片上 做成水 封片，用 不低 于10 40的 光学 显微 镜对 水封片进 行观 察，每一 检样 应观察 不少 于50 个视 野。5.3.2 细菌检 验 DB42/T 1839 2022 6 将检验 样本 按无 菌操 作接 种于营 养肉 汤培 养液（蛋 白 胨10 g、牛 肉膏3 g、氯化 钠5 g、蒸 馏水1000 mL，pH 值7.0 7.2）中，在温度37 1条件下培 养24 h，观 察培养液是否浑浊。培养液 浑浊，为有细 菌污染；培养 液澄 清，为无 细 菌污 染。5.3.3 霉菌检 验 将检验 样本按 无菌 操作接 种于PDA 培养 基（参 见附 录A）中，在25 28 条 件 下培养3 d4 d，出现大球 盖菇 以外 的菌 落，或有异 味者 为霉 菌污 染物，必要 时进 行水 封片 镜检。5.3.4 菌丝体 形态、螨 虫检 验 取适量 菌丝 体用 放大 镜或 显微镜 镜检 观察。5.3.5 母种栽 培农 艺性 状和 商品 性状检 验 5.3.5.1 母种性 状检 验 按NY/T 1731-2009中“9 出 菇试验”的规定 进行 母钟 栽培农 艺性 状检 验和 商品 性状检 验。将被 检 母种 制作 成原 种，参见 附录A 中A.2 配方,制成 菌袋。按 照常规 方法 发菌、覆土 出 菇。按 表5 检验 项目 做好 栽培记录。表5 母种栽 培农 艺性 状和 商品 性状检 验记 录 检验项目 检验结果 母种栽培农艺性状检验 检验结果 母种长满所需时间 d 总产kg 原种长满所需时间 d 平均单产 kg/m2 栽培种长满菌瓶（袋）所需时间 d 总生物学效率%出第一潮菇所需时间 d 色泽、质地 第一潮菇产量 d 菇形（菌盖直径，菌柄长度 mm）第一潮菇生物学效率%5.3.5.2 总生物 学效 率（%）计算 总生物 学效 率计 算式：BE=10 0%(1)式中：BE 生 物学 效率；Ffw 大 球盖 菇子 实体 鲜品质 量，单位 为千 克（kg）；Sdw 培 养料 风干 物质 质量，单位 为千 克（kg）。判定规 则 按本文 件“4 章质量 要求”进行，检验项 目全 部符合 要求即 为合格 菌种，有一 项不合 格即为 不合 格菌种。不合 格菌 种按NY/T 1731-2009 中“12 不 合格 品处理”的 规定 执行。6 标签、标志、包 装、运输 和贮存 标签、标志 DB42/T 1839-2022 7 6.1.1 产品标 签 每支（瓶、袋、罐）菌种 标签内 容如 下：a)产品名 称（菌种 名称、菌 株代号、类 别）；b)生产单 位；c)接种日 期；d)产品规 格；e)信息代 码；f)执行标 准。6.1.2 包装标 签 菌种包 装运 输标 签内 容如 下：a)产品名 称（品种 名称、菌 株代号、类 别）；b)厂名、厂址、联 系电 话；c)出厂日 期；d)保质期、贮 存条 件；e)数量；f)执行标 准；g)菌种生 产经 营许 可证 编号。6.1.3 包装储 运图 示标 志 按GB/T 191 的规 定，应注 明以下 图示 标志：a)小心轻 放标 志；b)防水、防潮、防 冻标 志；c)防晒、防高 温标 志；d)防止倒 置标 志；e)防止重 压标 志。包装 6.2.1 母种外 包装 采用 木盒 或有 足够强 度的 纸箱，内 填棉 花、碎 纸等 缓冲 物。6.2.2 原种、栽培 种外 包装 采用 洁净、干燥 的塑 料箱、编 织袋、泡沫 箱或 有足 够强 度的纸 箱。运输 6.3.1 不应与 有毒、有 害、有异 味的物 品混 装混 运。6.3.2 运输工 具应 清洁、卫 生、无污染 物。6.3.3 宜采用 冷链 运输 车运 输，冷藏车 设置 温度 不高 于 20。6.3.4 运输中 应有 防震、防 挤压、防晒、防 尘、防雨 淋、防杂菌 污染 的措 施。贮存 6.4.1 母种 在46 冰 箱中 贮 存，贮 存期 不超 过 60 d。6.4.2 固体原 种和 固体 栽培 种要 求室内 避光 保存，环 境保 持清洁、干 燥，空气 相对 湿度 为 50%70%。当温度 在 20 以下 贮存 时，贮存 期不 超 过 20 d；当 温度 15 20 下 贮存，贮存期 不超 过 30 d；当温度在1 6 下贮 存，贮 存期不 超 过 60 d。6.4.3 摇瓶液 体菌 种、发酵 罐液 体菌种 均应 及时 使用，不 贮存。DB42/T 1839 2022 8 A A 附录A（资料 性）大球盖 菇菌 种培 养基 配方 A.1 母种PDA 培 养基 配方 马铃薯（去 皮）200 g，葡 萄糖20 g，琼脂20 g，水1000 mL，pH 值自 然。A.2 大球盖 菇固 体原 种及 栽培 种培养 基配 方 配方1：阔 叶树 木 屑35%，玉 米 芯49%，麸皮10%，玉米 粉5%，石膏1%，含水 量60%65%。灭 菌 后pH值最佳 范围6.0 6.5，允 许范围5.5 7.0。配方2：阔 叶树 木屑10%，玉米芯50%，麸皮12%，油糠15%，大豆 皮8%，玉 米 粉4%，石膏1%，含 水量60%65%。灭 菌后pH值 最佳范 围6.0 6.5，允许 范围5.5 7.0。配方3：阔叶 树木屑30%，玉米芯35%，麸皮10%，油 糠20%，玉米 粉4%，石膏1%，含水 量60%65%。灭菌后pH值 最佳 范围6.0 6.5，允许 范围5.5 7.0。A.3 大球盖 菇液 体菌 种培 养基 配方 配方1：葡萄糖2%，磷酸二 氢钾0.1%，硫 酸镁0.1%，麦麸0.1%，玉 米粉0.2%，豆粕0.3%，其 余水，pH 值自 然；配方2：黄豆粉0.3%1%，蔗糖2%3%，硫酸 镁0.03%0.1%，磷酸 二氢 钾0.03%0.1%，其余 水，pH 值自 然；配方3：玉米 粉1%，黄豆 粉2%，酵 母粉0.5%，葡萄 糖3%，磷酸 二氢 钾0.1%，硫 酸 镁0.05%，其 余水，pH 值自 然。